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De arriba abajo:
Desarrollo de un bioensayo de larvas. Diluciones seriadas de imidacloprida en medios de pulgas
Desarrollo de un bioensayo. Recuentos de pupas de pulgas en los medios
Diluciones seriadas de imidacloprida para una prueba de contacto in vitro en adultos
Pulgas muertas: exposición a imidacloprida activa en papel de filtro |
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Bioensayo y discusión
Como el objetivo del proyecto es controlar un gran número de cepas de campo de pulgas felinas, fue necesario
modificar levemente el bioensayo. Como concentración de ensayo estándar se seleccionó una única dosis de discriminación
de 3 mg de imidacloprida litro-1 en medio de pulgas.
Para determinar la sensibilidad de una cepa de campo, es necesario disponer de un mínimo de 40 huevos de pulga viables.
La imidacloprida disuelta en acetona se mezcla exactamente con el medio de crecimiento de las larvas de pulga, dejando
que se evapore la acetona totalmente antes de transferir el medio a las placas de Petri de vidrio. A continuación,
se exponen 20 huevos de pulga felina a los medios tratados y 20 a un control de acetona. Las placas de Petri se cubren
y se incuban a 26 - 28º C, 75 - 80 % de h.r. durante 28 días. Las placas de Petri se examinaron después de 5 días y
otra vez a los 11 - 14 días para controlar el desarrollo de larvas y/o pupas.
Tras 28 días, se recuentan las pulgas felinas adultas en las placas de control y en las tratadas. Se registra el recuento.
Si se produce supervivencia en las placas tratadas, las pulgas criadas en el medio de control se colocan sobre gatos
de laboratorio para su incubación. La crianza sobre los gatos de laboratorio es necesaria para aumentar el número
para los ensayos de seguimiento y las comparaciones con las cepas de laboratorio existentes.
Si se confirma supervivencia en el ensayo con 3 ppm, se determinarán los valores DL50 de esta cepa y de las cepas
de laboratorio con un estudio de dosis-respuesta en el rango de 0,005 a 3 mg litro-1 de imidacloprida.
Mediante la comparación de estos valores DL50 puede estimarse si se ha producido un sesgo en la susceptibilidad
frente a la imidacloprida. En ambos casos, se reinvestigarán ampliamente las cepas de pulgas.
Actualmente, se están estableciendo las pruebas in vivo que evaluarán la eficacia sobre el huésped de Advantage®.
Los mecanismos de resistencia genéticamente establecidos en insectos que consisten en la degradación favorecida de
los insecticidas a través de un aumento de la tasa de desintoxicación metabólica ya ha sido descritos.
En cooperación con Bayer Crop Science, se han realizado numerosos experimentos para caracterizar la resistencia metabólica
en pulgas. Además, en Biotechnology and Biological Science Research Council (BBSRC), Rothamstad, RU, se están investigando
intensamente los cambios moleculares que se producen en el lugar diana de los insecticidas, para establecer un ensayo
de selección molecular. La ventaja de este ensayo es que sólo se precisa una única pulga para determinar una posible
mutación en el lugar diana, mientras que los ensayos enzimáticos sólo puede realizarse con un amplio número de individuos.
En las pulgas se conoce perfectamente la presencia de una gran cantidad de mutaciones que confieren resistencias frente
a piretroides y ciclodienos, así como el aumento de la producción de enzimas responsables de las resistencias frente
a organofosfatos y carbamatos. Sin embargo, en las pulgas felinas, no pudieron detectarse resistencias frente al
neonicotinoide imidacloprida.
En 2001 y 2002, más de 190 recogidas distintas de huevos de cepas individuales de pulgas de EE.UU., RU
y Alemania se examinaron en el laboratorio con una dosis discriminatoria de 3 mg litro-1.
Ninguna de las muestras presentó una reducción de la sensibilidad a la imidacloprida. [8,11]
Con la combinación del bioensayo aprobado y los actuales ensayos metabólicos y moleculares evaluados puede determinarse a
tiempo la causa de cualquier reducción aparente de la sensibilidad.
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